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产品简介：

Phos-key是一种能与磷酸分子特异性结合的双核金属络合物，用于分离和检测磷酸化蛋白。在进行Phos-key SDS PAGE时，在常规SDS-PAGE凝胶中加入Phos-key和二价金属离子(Mn2+或Zn2+)即可分离不同条带中的磷酸化和非磷酸化蛋白。在电泳时，固定在凝胶上的Phos-key复合物可以特异性结合磷酸化蛋白，使得磷酸化蛋白电泳迁移率降低，从而实现磷酸化和非磷酸化蛋白的分离。能检测不同形式的磷酸化蛋白，不受磷酸化抗体限制，可用于免疫印迹、质谱分析等。

Phos-key SDS PAGE凝胶进行转膜时，Phos-key和金属离子会影响转膜效率，磷酸化蛋白的转膜效率显著低下。为了提高转膜效率，需使用 EDTA 去除二价金属离子。本产品为含10 mM EDTA的转膜液，用于在磷酸化蛋白凝胶转膜前进行凝胶预处理，螯合Phos-key 金属络合物中的金属离子，提高磷酸化蛋白的转膜效率。

保存条件：室温保存，12个月有效。

使用说明：

1. 转膜缓冲液(含10 mM EDTA，1×)可以直接使用，5X和10X使用时需要配制成1×工作液；

1. 按转膜缓冲液(含10 mM EDTA，5×):甲醇:蒸馏水=1:1:3的比例，配制成1×工作液；
2. 按转膜缓冲液(含10 mM EDTA，10×):甲醇:蒸馏水=1:2:7的比例，配制成1×工作液；

2. 凝胶预处理：将电泳后的Phos-key凝胶浸泡在含有10 mM EDTA的转膜缓冲液中，置于摇床上轻轻摇动10 min (重复1 - 2次)；

注：具体洗涤时间和次数可以根据凝胶厚度进行调整，洗涤时间不宜太长，避免蛋白质从凝胶中扩散或迁移出来。

3. 更换不含EDTA的转膜缓冲液清洗10 min；
4. 转膜：建议采用湿转法，200 mA，2 h，以获得更高的转膜效率。

注意事项：

1.密闭保存，开启后尽快用完；

2.尽量选择优级甲醇，分析纯甲醇也可使用；

3.仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内；

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。