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产品简介：

Phos-key是一种能与磷酸分子特异性结合的双核金属络合物，用于分离和检测磷酸化蛋白。在常规SDS-PAGE凝胶中加入Phos-key和二价金属离子(Mn2+或Zn2+)即可分离不同条带中的磷酸化和非磷酸化蛋白。在电泳时，固定在凝胶上的Phos-key复合物可以特异性结合磷酸化蛋白，使得磷酸化蛋白电泳迁移率降低，从而实现磷酸化和非磷酸化蛋白的分离。能检测不同形式的磷酸化蛋白，不受磷酸化抗体限制，可用于免疫印迹、质谱分析等。

3×磷酸化蛋白上样缓冲液是一种专门设计用于Phos-key SDS-PAGE的上样缓冲液，专用于磷酸化蛋白样品的上样。本产品为中性配方，适用于在pH 5 - 8的生理环境下生成稳定的复合物。本产品含SDS和β-巯基乙醇。

保存条件：-20℃保存，有效期12个月。

实验步骤：（仅供参考）

1.按照每2 μL蛋白样品加入1 μL上样缓冲液(3×)的比例混合；

2.混匀后，95℃孵育5 - 10 min，以充分变性蛋白；

3.冷却至室温后，用微量移液枪上样到 PAGE 胶加样孔内；

4.当溴酚蓝到达 PAGE 胶底部附近时即可停止电泳。

Phos-key SDS-PAGE样品制备的要求：

1．确保样本中不含有 EDTA 等金属离子螯合剂;

2．样品中含有的还原剂、变性剂、螯合剂、钒酸等会使电泳条带发生弯曲或者拖尾，可通过TCA沉淀或透析脱盐降低杂质含量；

3．避免样品中含有高浓度的还原剂，变性剂，表面活性剂等；β-巯基乙醇浓度不高于0.2 M（或者5%）；

4．ATP使用浓度在2.0 mM时，对实验结果无显著影响，具体使用范围尚不清楚；

5．样品可以为纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液，且样品来源无物种特异性。

注意事项：

1.本产品为 3× 母液。

2.建议分装冻存，避免反复冻融。

3.仅限于专业人员科学研究用，不得用于临床医学诊断及其他非合理用途。不得存放于普通住宅内。 为了您的安全和健康，请穿戴好个人防护装备和实验服装进行操作。